Небезпечне захворювання, яке цілком заслужено називають "чумою двадцять першого століття". Саме тому на боротьбу з цією недугою витрачаються величезні кошти та ресурси, як і на його дослідження. Справа в тому, що вірус імунодефіциту ще не до кінця вивчений. Нові відкриття дозволяють вченим розробляти вакцини та лікарські засоби для боротьби з ним. У сучасній медицині велика увага приділяється і методам діагностики захворювання. Одним із найефективніших способів виявлення вірусу лікарі у всьому світі визнають ПЛР. На ВІЛ цей метод проводиться у вигляді дослідження ДНК. Що таке дослідження, яка його достовірність і як підготуватися до здачі аналізу?
Що являє собою аналіз на ВІЛ – ПЛР?
Насамперед слід розшифрувати цю абревіатуру. Полімеразна ланцюгова реакція (метод ПЛР на ВІЛ) - це діагностика, яка не знайшла широкого застосування в безкоштовній медицині в нашій країні. Причин тому кілька. Але основна полягає в тому, що подібне дослідження коштує недешево. При цьому ефективність його становить приблизно вісімдесят відсотків, коли у імуноферментного аналізу та імунного блоттингу достовірність вища. Вона становить від 95 до 98 відсотків. Звичайно, виявити ВІЛ шляхом ПЛР можна. Він також використовується в інших цілях. За допомогою дослідження ДНК та РНК визначають генетичні та спадкові захворювання, а також інфекційні та вірусні недуги.
Що являє собою ПЛР на ВІЛ, достовірність якого, як уже було сказано вище, становить лише вісімдесят відсотків, і чому цей діагностичний метод отримав таку назву? Для дослідження такого типу використовують кілька видів біологічного матеріалу. Це насамперед кров, якщо йдеться про вірус імунодефіциту. Також для забору аналізу на ВІЛ методом ПЛР використовуються виділення із статевих жіночих органів та сперма. Слина у разі не досліджується. Бо це малоефективно. У слині міститься незначна кількість клітин вірусу. Те ж саме можна сказати про сечу, піт і слізну рідину.
ВІЛ – ПЛР виявляє антиген чи ні? Це питання нерідко ставлять фахівцям у галузі медицини. Відповідь на нього не може бути позитивною. Оскільки цей метод діагностики спрямовано дослідження саме ДНК і РНК. Якісний ПЛР на ВІЛ проводиться у певній послідовності. У передбачуваного інфікованого виробляють забір необхідного біологічного матеріалу. Найчастіше для такого дослідження беруть венозну кров. До речі, перед цим пацієнту не рекомендують вживати жирну їжу протягом декількох діб. Дослідження проводиться натще. Біологічний матеріал поміщають у спеціальний лабораторний реактор, де його розщеплення. Далі до біологічного матеріалу додають певні ферменти (для кожного захворювання або для кожної патології вони різні). Для того щоб синтезувати копію мікроба, вірусу або інфекції, з їхньою ДНК зв'язуються дані ферменти.
Відбувається це у кілька етапів за принципом ланцюгової реакції. Спочатку з однієї молекули дезоксирибонуклеїнової кислоти виходить дві, навіщо чотири тощо. По завершенню кількох циклів дослідження лаборант отримує сотні або тисячі копій ДНК досліджуваного матеріалу, завдяки чому з легкістю може порівняти їх із ДНК будь-яких патогенних організмів, інфекцій та патологій на генетичному рівні, у тому числі вірусу імунодефіциту. Завдяки такому дослідженню хворі можуть здати ПЛР на ВІЛ першого чи другого типу. З його допомогою також вдається визначити концентрацію клітин вірусу крові людини. Якщо ПЛР на ВІЛ позитивний, але йому не передував імунний блот або ІФА скринінг, то пацієнта направляють на дані типи досліджень. Якщо ж полімеразної ланцюгової реакції передував один із вищеперелічених видів дослідження, то сумнівів у фахівців у галузі медицини не залишається. І тут людині ставлять конкретний діагноз. Якщо ПЛР на ВІЛ негативний, але в лікарів залишаються сумніви, то хворого також можуть направити на додаткові дослідження. Варто зазначити, що хибнопозитивний результат у випадку з даним методом діагностики виявляється частіше, ніж хибно-негативний. Важливо знати, що ПЛР методом мазка або зіскрібка на ВІЛ не виробляється.
Де здати аналіз крові ПЛР на ВІЛ, і чи можна це зробити безкоштовно?
Як мовилося раніше вище, дослідження цього типу дуже поширене у Росії. І причиною цього є його дорожнеча. Це дозволяє зробити висновок про те, що здати аналіз ПЛР на ВІЛ (достовірність ПЛР на ВІЛ 2 типу та 1 типу однакова) у звичайній державній поліклініці не можна. Для цього доведеться звернутися до спеціалізованої лабораторії або платної клініки. У великих містах існують спеціалізовані СНІД-центри, де аналізи ПЛР виробляються на комерційній основі. У населених пунктах якнайменше можливість пройти дослідження такого типу є не у всіх, проте жителі таких місць завжди можуть відвідати великі міста, щоб приділити увагу власному здоров'ю.
Через скільки здавати ПЛР на ВІЛ після передбачуваного зараження?
Про те, через скільки можна здати ПЛР на ВІЛ, нерідко запитують у фахівців галузі медицини. І тут жодної різниці між дослідженнями немає. І полімеразна ланцюгова реакція, і ІФА тест з імунним блоттингом слід проводити не раніше ніж через три – чотири тижні після передбачуваного інфікування. Раніше за цей термін дослідження проводити не має сенсу. ВІЛ через 10 днів ПЛР не виявить.
У деяких випадках виявити інфекцію вдається раніше чи пізніше зазначеного терміну. Але це залежить від конкретних особливостей організму досліджуваного. Важливо знати, що за допомогою полімеразної ланцюгової реакції можна виявити не лише інфікованих, а й носіїв вірусу. Терміни ПЛР на ВІЛ залежить багато в чому від лабораторії, в якій проводиться діагностика. У середньому вони становлять трохи більше доби. Але існує й експрес-дослідження, яке потрібне при переливанні крові або в екстреній медицині.
Роль ПЛР діагностики ВІЛ-інфекції у неонатології
ПЛР-тест на ВІЛ використовується у неонатології у тому випадку, коли у інфікованих жінок з'являються діти. Всім відомо, що в цьому випадку надзвичайно великий ризик передачі вірусу від матері дитині. У всіх новонароджених, матері яких є зараженими або носіями вірусу імунодефіциту, в момент появи на світ у крові вже є антитіла до вірусу імунодефіциту, незалежно від того, відбулося інфікування чи ні. За допомогою ПЛР діагностики на ВІЛ вдається виявити, чи є вони так званим захистом імунної системи або наслідком інфікування. У перші дні життя немовлят дослідження такого типу не провадиться. Адже якщо інфікування відбувається під час появи світ через родові шляхи, то відразу ж проведений аналіз не зможе виявити захворювання. Він покаже його лише тому випадку, якщо інфікування було внутрішньоутробним. Точність ПЛР на ВІЛ у новонароджених дітей також становить приблизно вісімдесят відсотків.
ПЛР на ВІЛ – один із найдостовірніших методів постановки цього небезпечного для здоров'я та життя людини діагнозу. Лікар може рекомендувати проходження дослідження будь-якій людині, яка має підстави підозрювати зараження вірусом імунодефіциту людини. Часто пацієнти цікавляться, у чому суть методики, і які її переваги та недоліки.
Коли і в який термін варто відвідати лікарню, щоб здати біоматеріал на дослідження?
ПЛР – діагностичний підхід, що виник клінічній медицині завдяки молекулярної біології. Саме з цієї галузі науки дослідження прийшло в медицину. І стало активно використовуватися для встановлення різних діагнозів, включаючи зараження ВІЛ-інфекцією.
Всім відомо, що будь-який живий організм складається з ДНК та РНК. Полімеразна ланцюгова реакція заснована на здатності цих нуклеїнових кислот до самовідтворення.
Важливо пам'ятати, що ПЛР здатна визначати навіть невеликі концентрації вірусних часток у крові. Відбувається це завдяки тому, що в біологічній рідині циркулюють «уламки» нуклеїнових кислот, які вловлюються та розпізнаються спеціальною апаратурою. Це дозволяє встановити правильний діагноз навіть у тому випадку, якщо зараження відбулося зовсім недавно.
І вірусні частки ще встигли розмножитися в організмі пацієнта. Отриманий від пацієнта біологічний матеріал міститься у спеціальний реактор. Найчастіше використовується венозна кров.
Спеціальні компоненти, взаємодіючи із частинками вірусу, багаторазово збільшують кількість виявлених фрагментів. У результаті фрагменти стають обумовленими, їх можна оцінити та зробити висновки про зараження.
Здають кров із вени за стандартною методикою.
Перед відвідуванням лікаря не їдять, приходити краще з ранку. Якщо пацієнт проходить курс імуностимуляції, необхідно перервати його протягом двох тижнів до аналізу.
Плюси та мінуси методики
Як і будь-який інший метод діагностики тієї чи іншої хвороби, ПЛР-дослідження має низку переваг та недоліків. До переваг методу відносять:
- низьку ймовірність зіткнутися з хибнонегативним або хибнопозитивним результатом;
- можливість використовувати для дослідження не тільки кров, але й інші біологічні рідини, такі як виділення з піхви, сперма та ін. (Щоправда, як відзначають лікарі, точність може знижуватися);
- можливість використовувати один раз взятий матеріал для діагностики відразу декількох захворювань;
- швидкість отримання результатів (якщо аналіз терміновий, то результати одержують вже наступного дня);
- можливість швидко діагностувати зараження і, відповідно, розпочати терапію захворювання, покращивши таким чином прогноз;
- відсутність обмежень за віком (забір крові з вени можна виконати навіть новонародженому малюкові).
Звичайно, недоліки у ПЛР теж є. До них відносять:
- чималу ціну на дослідження, особливо в порівнянні з базовими скринінговими методами, що застосовуються у більшості лікарень;
- необхідність наявності складного обладнання, яке також коштує недешево;
- ймовірність все ж таки зіткнутися з помилковими результатами, якщо порушена технологія виконання аналізу, процес забору крові або людина страждає від аутоімунного, пухлинного або хронічного інфекційного захворювання.
Звичайно, виконувати ПЛР дослідження варто за рекомендацією лікаря.
Лікар зможе оцінити у кожному конкретному випадку, наскільки достовірними будуть результати. Якщо лікар вважає це за необхідне, він замість ПЛР порадить своєму пацієнтові інший метод діагностики. Або після отримання результатів доповнить план діагностичних заходів додатковим пунктом.
Багато пацієнтів хвилює питання, чи всім людям робиться ПЛР-дослідження на ВІЛ. Насправді діагностика є обов'язковою не для всіх. Проте є групи пацієнтів, яким іноді доводиться здавати кров для аналізу.
- Попередня діагностика
- Позитивне імуноглобулінове дослідження
Імуноблотинг, який дав позитивний результат на вірус імунодефіциту людини, обов'язково підтверджують за допомогою полімеразної ланцюгової реакції. Аналогічно надходять, якщо ПЛР виконувалася першою. Доповнення досліджень майже повністю виключає ймовірність помилок.
- Контроль терапії
Пацієнти з підтвердженим ВІЛ-статусом регулярно здають кров на ПЛР. Це необхідно, щоб контролювати хід лікування та, якщо необхідно, коригувати терапію.
- Оцінка безпеки крові
Будь-яка донорська кров має бути досліджена за допомогою полімеразної ланцюгової реакції.
Це виключає передачу ВІЛ-інфекції через переливання крові.
- Оцінка статусу новонародженого
Якщо дитина народжена від ВІЛ-позитивної жінки, їй також обов'язково виконується ПЛР. Це необхідно, щоб визначити статус дитини та виробити тактику її подальшого відання.
Достовірність дослідження
Багатьох пацієнтів хвилює питання, наскільки достовірна полімеразна ланцюгова реакція у разі, якщо планується діагностувати вірус імунодефіциту людини. Незважаючи на те, що ПЛР – це одна з найсучасніших методик, на всі 100% все ж таки не можна довіряти навіть їй.
Сьогодні ПЛР досі не використовується як скринінговий метод саме через те, що може давати хибнопозитивні результати.
Щоб уникнути цього, лікарі рекомендують правильно готуватися до забору біоматеріалу, але підготовка не завжди допомагає. Наприклад, тест може дати позитивний результат, якщо людина має злоякісна пухлина в організмі. Якщо він страждає від будь-якої хронічної інфекції або, наприклад, аутоімунного процесу. Навіть незважаючи на наявність ймовірності отримати хибнопозитивний результат, ПЛР використовується в практиці як один з найнадійніших методів.
Щоб виключити помилки, лікарі часто рекомендують своїм пацієнтам здавати аналіз повторно, якщо результат виявився позитивним. Також у ряді випадків рекомендується додатково проводити ІФА реакцію та інші дослідження. Виконання комплексу тестів завжди дає достовірніший результат, ніж виконання лише одного дослідження.
Для чого можна використати тест
Не всі пацієнти знають, навіщо безпосередньо застосовується полімеразна ланцюгова реакція у клінічній практиці лікаря.
- Необхідно виявити захворювання у латентному періоді
Вірус імунодефіциту протягом тривалого часу може існувати в організмі латентно.
ПЛР - єдине дослідження, здатне вказати на присутність патогену в організмі. Навіть у тому випадку, якщо вірусних часток ще зовсім мало.
- Встановлення генотипу
Сьогодні виявлено кілька генотипів ВІЛ-інфекції. Часто важливо визначити, який саме генотип заразив людину, оскільки від цього залежить вибір противірусних препаратів.
- Визначення саме вірусу, а не антитіл до нього
Одна з переваг аналізу полягає в тому, що за допомогою методики можна виявити антитіла до вірусних частинок, а безпосередньо сам вірус.
Чому це саме перевага, цікавляться багато пацієнтів. Справа в тому, що якщо акцент робиться на виявлення самого патогена, зменшується можливість зіткнутися з хибнопозитивними реакціями через схожість різних антитіл. Як відзначають лікарі, багато в чому саме здатність визначати сам вірус, а не антитіла зробила методику такою ефективною.
У які терміни здавати
Часто пацієнти цікавляться питанням, через скільки можна відвідати лікаря, щоби здати біологічний матеріал.
Все залежить від того, що планується визначати за допомогою методики.
ДНК вірусу імунодефіциту людини рекомендується шукати в тому випадку, якщо є підозра на зараження інфекцією, і потрібна рання діагностика. У крові ДНК у середньому починає визначатись через десять днів після того, як зараження відбулося. Однак аналіз рекомендується підтвердити за допомогою ІФА спочатку через 4 тижні від зараження, а потім через 12 тижнів.
Якщо ІФА підтверджує діагноз, статус пацієнта розцінюється як позитивний.
Дослідження визначення РНК завжди має кількісний характер. Його рекомендується проводити у тому випадку, якщо позитивний статус пацієнта підтверджений, і розпочато лікування за допомогою противірусної терапії. Якщо організмі багато РНК, то діагностується гостра фаза захворювання. Якщо мало - вважається, що придушення патогену пройшло успішно, і терапія може бути змінена більш щадну.
- Оцінка резистентності
Деякі штами ВІЛ виявляють резистентність до препаратів, які використовуються для їх лікування. Щоб оцінити ймовірність відсутності реакцію лікування, також рекомендується проводити дослідження. Її виконують, якщо після призначення терапії покращення не настає. Також вона рекомендована у гострий період інфекційного процесу.
Вірус імунодефіциту людини з кожним роком поширюється в людській популяції дедалі активніше. Зіткнутися з патологією може будь-яка людина, тому іноді життєво необхідно знати, як правильно поставити діагноз.
ПЛР – добрий метод діагностики, якщо він правильно використовується лікарем. А пацієнту головне - дотримуватися рекомендацій лікаря з підготовки до дослідження, в яких немає нічого складного.
Чому такий страшний ВІЛ та СНІД, які існують методи діагностики. Поглиблена інформація для ПЛР-дослідження.
За статистикою, наданою Всесвітньою організацією здоров'я спільно з організацією ООН ЮНЕЙДС, за останні сорок років понад 25 мільйонів пацієнтів померли від захворювань на ВІЛ та СНІД. Недаремно епідеміологи охрестили ВІЛ чумою 20-го століття, оскільки шкода, завдана цією інфекцією людству, має колосальні масштаби. Найбільш сильно заражені країни африканського континенту. Зараження сильно б'є по економіці і без того нестабільних держав, народ жебрак.
При симптоматиці, що з'явилася, надзвичайно важлива оперативна діагностика.зараження організму на ВІЛ-інфекцію, тому що вчасно пройдений курс терапії здатний врятувати або хоча б збільшити термін життя пацієнта. В даний час технологічний прогрес зробив крок далеко: винайдені новітні методи діагностики вірусу ВІЛ і СНІДу, лікування доступне для будь-якої людини планети, достовірність аналізів характеризується малою часткою похибки, а терапія більшим відсотків ефективності.
Діагностика інфекції ВІЛ
У нашій країні виявлення присутності в організмі пацієнта ВІЛ-інфекції є комплекс аналізів:
- Імуноферментний аналіз
- Імунний блот
- Полімеразна ланцюгова реакція
- Експрес-тести
Імунофермнтний аналіз.
Скринінг (тест ІФА)є початковою стадією визначення зараження у організмі. Він базується на утворених в штучних умовах білкових сполуках вірусу, які ідентифікують антитіла, що продукують імунними клітинами, як реакцію на зараження. Відбувається хімічна реакція між реактивами, унаслідок чого індикаторний елемент змінює колір. Отже результат тесту позитивний. Інформацію щодо такого способу можна отримати через кілька тижнів з моменту інфікування. Такий метод виявляє не присутність інфекції у пацієнта, а визначає антитіла, що виробляються до цієї інфекції. Буває, продукування антитіл стартує через 10-15 днів з моменту інфікування, але в переважній більшості випадків пізніше – через 1-1,5 місяці.
Інформація щодо такого аналізу обробляється від двох до десяти днів.
Достовірність діагозу на ВІЛ підкріплюється аналізом ІХ. Винятково позитивний тест ІБ на вірус може бути важливою причиною затвердження інфікування.
Суть аналізу:
У лабораторії беруть пробу венозної крові на аналіз. Пробу додатково готують, білкові сполуки, які в ній присутні, електризуються у випробувальній камері, далі їх розподіляють у гелевій субстанції відповідно до молекулярної маси. Паперову смугу з напиленням реактиву кілька разів поміщають у підготовлену пробу. За наявності в пробі антитіл до вірусу відбувається хімічна реакція і на тестовій смузі стають видні рисочки. Коли з'являються 2 або 3 рисочки p24, gp41 і gp120 або gp160, результат тесту позитивний.
При отриманні позитивного результату аналізу ІБ з похибкою в один відсоток можна зробити висновок про наявність інфекції ВІЛ в організмі.
Експрес-тести на ВІЛ та СНІД
Найновішими технологіями для визначення вірусу імунодефіциту в організмі є експрес-методи. Інформацію щодо такого аналізу можна отримати через кілька хвилин після проведення. Найбільш висока достовірність у імунохромаграфічних тестів - спеціальних тест-смужок, на поверхні яких напилюється шар реагенту. Антитіла, що містяться в матеріалі, контактує з реагентом, змінюючи забарвлення індикатора. За кілька хвилин виявляються дві смужки, що свідчить про наявність інфекції. Наявність єдиної лінії означає відсутність інфекції.
Такий тест можна використовувати як додатковий, інформація щодо такого тесту обов'язково підтверджується іншими дослідженнями.
Скільки коштує експрес-тест на ВІЛ?
Експрес-тест на ВІЛ у середньому коштуватиме 200-1000 рублів.
Методика ПЛР-діагностування спочатку була розроблена 35 років тому американським вченим Карі Муллісом. Винахідник дослідження отримав міжнародну Нобелівську нагороду у 1993 році за своє новаторство. Воно стало незамінним для будь-якої лабораторної діяльності.
ПЛР використовується в молекулярній біології, щоб зробити безліч копій (ампліфікувати) невеликих ділянок ДНК. ДНК-полімераза може додавати нуклеотид тільки в існуючу раніше 3-OH-групу. Тому йому потрібен праймер, якого він може додати перший нуклеотид. Ця вимога дозволяє визначити конкретну ділянку послідовності шаблонів, яку необхідно діагностувати. Наприкінці реакції ПЛР конкретна послідовність накопичуватиметься у мільярдах копій (ампліконів).
ПЛР включає процес нагрівання і охолодження, званий термічним циклом, який виконується спеціалізованою технікою. Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) є простою методикою. Вона посилює ДНК-матрицю для отримання специфічних фрагментів ДНК in vitro (аналіз пробірки). Традиційні методи клонування послідовності ДНК у векторі та її реплікації у живій клітині часто вимагають проведення досліджень від кількох днів до кількох тижнів роботи. Але отримати результати ампліфікації послідовностей ДНК за допомогою ПЛР можна за кілька годин.
Більшість біохімічних аналізів, які у діагностиці інфекційних захворювань, вимагають досить великої кількості біологічного матеріалу. Для ПЛР ця умова не є обов'язковою. Таким чином, ПЛР може забезпечити чутливіше виявлення патогену. І більш високі рівні ампліфікації певних послідовностей менший час з досить обмеженою кількістю біоматеріалу. Ці особливості роблять техніку надзвичайно корисною. Не лише у фундаментальних дослідженнях, а й у особистих цілях. Включно з тестуванням генетичної ідентичності, судовою експертизою, промисловим контролем якості.
Основна цінність аналізу полягає у можливості виявлення патологій, що передаються статевим шляхом, до розвитку перших ознак. До аналізу методом ПЛР вдаються за необхідності ранньої діагностики ВІЛ-інфекції. А також визначення РНК вірусу у крові донора. Завдяки високій чутливості аналізу отримати відповідь можна через 7-14 днів після передбачуваного інфікування. Достовірність діагностики сягатиме від 85 до 98%. Проте тест ПЛР призначається не всім. Оскільки є досить дорогим дослідженням. Головне, вимагає наявності дорогого обладнання та певних професійних навичок від працівників лабораторії. Якщо пацієнт раніше не перебував у ситуаціях, пов'язаних із підвищеним ризиком зараження, проведення полімеразної реакції не є доцільним.
Полімеразна реакція якісного типу на ВІЛ
Проведення якісного ПЛР на ВІЛ дозволяє визначити наявність в організмі вірусного захворювання. Пацієнт може отримати результат у вигляді наступних позначок: позитивний, хибнопозитивний, негативний. Але дослідження не дає змоги визначити кількість копій ретровірусу. Якісний аналіз не проводиться пацієнтам, у яких раніше була діагностована інфекція. Не призначається як контроль за ефективністю противірусної терапії.
ПЛР кількісного типу на ВІЛ
Проводиться для визначення копій РНК вірусу в біологічному матеріалі пацієнта. Кількісний ПЛР призначається тільки хворим з раніше виявленою інфекцією, як моніторинг лікування.
ПЛР у реальному часі
Використовується у лабораторній діагностиці для утворення копій ділянок ДНК. Також для одночасного кількісного дослідження та детекції послідовності ДНК у біоматеріалі. По суті, діагностика є кількісним ПЛР.
На замітку!
У різних лабораторіях можна зустріти кілька формулювань діагностики: «ПЛР кількісне визначення» та «ПЛР у режимі Real-time».
Обидва аналізи є ідентичними.
Взяти матеріал для діагностики ВІЛ
Забір біологічного матеріалу для проведення діагностики ВІЛ за допомогою ПЛР проводиться за певними стандартами. Маніпуляція проводиться у процедурному кабінеті. Використовуються одноразові стерильні інструменти. Розтин пакету з інструментами проводиться безпосередньо біля пацієнта. Зібраний матеріал міститься в стерильні пробірки, попередньо оброблені CrO3 (хромова суміш). Як біологічний матеріал виступає венозна кров, яка здається в ранковий час і на голодний шлунок. За кілька днів до здачі аналізу слід виключити вживання алкоголю, жирної та гострої їжі, припинити прийом медикаментозних препаратів.
Якщо скасувати лікарські засоби неможливо, це слід повідомити до проведення аналізу.
Додатково може бути взятий мазок з уретри та піхви, для виявлення супутніх захворювань, що передаються статевим шляхом. Дослідження проводиться анонімно, результати пацієнт отримує особисто до рук. При собі рекомендується мати посвідчення особи.
Через скільки часу можна здавати ПЛР на ВІЛ
Виявити наявність ВІЛ-вірусу можна через 4-6 днів після інфікування. У разі інформативність аналізу досягатиме 85%. Через 10-13 днів аналіз може визначити захворювання з точністю до 98%. Негативний результат буде вірним лише за умови його здачі не раніше, ніж через 2 тижні після передбачуваного зараження.
Причини хибнопозитивного результату
Отримати хибнопозитивний результат досить складно.
Таке можливе за недотримання правил забору біологічного матеріалу, неправильного маркування пробірки, використання неякісної тест-системи та інших подібних факторів. В інших випадках шанс отримання такого результату становить не більше ніж 2%.
Через скільки часу можна одержати результати аналізу?
Якщо дивитися з технічного боку, результати ПЛР можна отримати протягом 4 годин. Однак на практиці пацієнт лабораторний висновок отримує від одного до кількох днів. Загалом терміни проведення залежать від завантаженості лабораторії та від того, наскільки організовано побудовано її роботу.
Проведення полімеразної реакції у новонародженого
ПЛР призначається у разі, коли дитина народжена від ВІЛ-позитивної матері. Проведення ІФА у разі не інформативно. Оскільки у дитини приблизно до 2 років зберігаються антитіла проти ретровірусу. Тому імуноферментне дослідження не дасть точної відповіді. При проведенні ПЛР у дитини віком 4-6 тижнів та отриманні позитивного результату йтиметься про зараження.
Якщо ПЛР, проведений у віці від 8 тижнів до півроку, показує негативні результати (за умови, що дитина не харчувалася грудним молоком матері), інфікування виключається.
Чому для визначення ВІЛ ПЛР краще за ІФА?
Полімеразна реакція дозволяє виявити РНК вірусу, його наявність у організмі, зокрема кількісне. Завдання ІФА полягає у визначенні антитіл до ВІЛ-інфекції. Імуноферментний аналіз щодо визначення можливого інфікування не поступається ПЛР, його точність сягає 99%. Проте, на відміну ПЛР - неспроможний визначити захворювання на ранніх стадіях його розвитку.
Переваги проведення ПЛР на ВІЛ
- Полімеразна реакція безпосередньо визначає наявність інфекційного агента. Наприклад, ІФА може виявити виключно антитіла та продукти життєдіяльності мікроорганізму.
- Аналіз чітко ідентифікує конкретний патогенний мікроорганізм, навіть за наявності кількох перехресно реагованих.
- Методика дозволяє досліджувати будь-який вид біологічного матеріалу, зокрема засохлі краплі крові.
З недоліків ПЛР можна назвати підвищену чутливість аналізу. Це іноді стає причиною отримання хибнопозитивного результату. Таке відбувається у разі присутності в пробірці або інструментах хоча б незначної кількості стороннього ДНК.
Діагностика ВІЛ за допомогою ПЛР та ІФА: розшифровка, достовірність результатів
Імуноферментний аналіз, при якому результати тестування вказують на відсутність в організмі антитіл до ВІЛ та антигену р24 є негативним. У разі наявності даних молекул - видається позитивний діагностичний висновок. У ряді випадків пацієнт може отримати хибнопозитивний або хибнонегативний результат. Подібне є наслідком раннього терміну вагітності, герпетичної інфекції, некоректно проведеного забору матеріалу, порушення транспортування пробірок. Крім того, подібні результати зустрічаються у пацієнтів з аутоімунними захворюваннями, що протікають, і гепатитами різного типу. Може проводитися Western Blot (імуний блот), який поєднує в собі ІФА та поділ білків вірусу.
Тоді позитивний результат буде за наявності глікопротеїду вірусної інфекції GP160. Він є попередником глікопротеїнів оболонки ВІЛ gp41 та gp120. Якщо даних молекули відсутні, висновок лабораторного дослідження вважається негативним. Проведення Western Blot у поєднанні з ІФА дає змогу отримати результати, достовірність яких перевищує 98%. У разі коли ІФА позитивний, а Western Blot негативний - тестування вважається сумнівним і вимагає проведення ПЛР.
Вірус імунодефіциту людини – одне з найстрашніших захворювань минулого та нинішнього сторіччя. Його вивчення, пошук вакцин та препаратів приносять певні плоди. Проте повністю перемогти небезпечну недугу на сьогоднішній день фахівцям у галузі медицини не вдалося. Сучасні методи діагностики дозволяють не тільки виявити вірус імунодефіциту на ранній стадії, а й контролювати перебіг захворювання надалі. Для того, щоб ухвалити рішення про необхідність застосування тієї чи іншої терапії, використовується РНК ВІЛ-аналіз. Застосовується він і виявлення даного захворювання. Тут важливо зазначити, що аналіз РНК ВІЛ перестав бути повсюдним. Застосовують його лише у разі потреби. Як проводиться таке дослідження, у яких випадках його застосовують та яка його достовірність?
Вірус ВІЛ з РНК: суть дослідження
Перш ніж говорити, яким чином виробляється визначення РНК ВІЛ, слід з'ясувати, що позначає ця абревіатура, і яку роль вона грає в організмі. Рибонуклеїнова кислота - це молекула, вміст якої відзначається у всіх живих організмах та деяких вірусних інфекціях. Синтез цієї молекули проводиться на основі матриці дезоксирибонуклеїнової кислоти. Відповідають ці процеси певні ферменти. Це полімерази рибонуклеїнової кислоти.
Суть дослідження такого типу полягає у перевірці генного матеріалу вірусу. Для того, щоб зробити РНК аналіз на ВІЛ фахівці в галузі медицини використовують полімеразну ланцюгову реакцію. ПЛР дозволяє багаторазово збільшити обсяги біологічного матеріалу, що використовується для дослідження, завдяки чому він перевіряється в кілька етапів з використанням порівняльного методу. Варто зазначити, що використовується ПЛР на РНК не лише за ВІЛ. Така методика дозволяє виявити велику кількість спадкових захворювань, деякі віруси та інфекції. Застосовується вона і визначення спадкових генетичних патологій. Як біологічний матеріал використовується сперма, слина і кров. У разі вірусу імунодефіциту кращим матеріалом вважаються сироватка і плазма крові.
Тест РНК ВІЛ проводиться у кілька етапів. Після того, як у пацієнта здійснено забір крові, вона прямує до лабораторії. Біологічний матеріал поміщають у спеціальний реактор, де відбувається його розщеплення. Для синтезу застосовують особливі ферменти. Далі в штучно створених умовах з однієї молекули РНК синтезують дві, дві чотири і так далі. При досягненні їх потрібної кількості відбувається порівняння з різними типами вірусів. До речі, на виході з однієї молекули рибонуклеїнової кислоти виходить кілька сотень або тисяч молекул. РНК ВІЛ ультрачутливий буває кількох видів. Тут усе залежить від мети дослідження.
РНК ВІЛ 20 ме/мл: точність та достовірність методу, види
У сучасній медицині застосовується два методи дослідження рибонуклеїнової кислоти. Йдеться про кількісний та якісний РНК ВІЛ. Обидва ці методи дослідження схожі, але несуть різні цілі. РНК ВІЛ кількісний – це визначення вірусного навантаження. Кількість вірусних молекул генетичної тканини може говорити багато про що. Зокрема про те, на якій стадії перебуває захворювання зараз. Усім відомо, що вірус імунодефіциту їх кілька. Після настання сероконверсії кількість клітин вірусу збільшується і його виявлення стає можливим. На початкових етапах захворювання на РНК ВІЛ кількісний, норма якого встановлюється в лабораторії, дозволяє не тільки виявити вірус імунодефіциту, але і прийняти рішення про необхідність прийому антиретровірусної терапії. Визначивши кількісне вірусне навантаження, фахівець може прийняти рішення, яку схему терапії необхідно використовувати пацієнту.
РНК ВІЛ якісна для новонароджених використовується часто. Проводити його можна і у дорослих людей, наприклад, щоб визначити тип вірусу. Але вартість такого дослідження не дозволяє впровадити його до всіх медичних закладів. Тому застосовують його в педіатрії та неонатології.
Достовірність РНК ВІЛ, проведеного із чутливістю 20 ме/мл, велика. Вона становить приблизно дев'яносто один відсоток. Однак у сучасній медицині існують методи, достовірність яких вища. Саме тому визначення наявності чи відсутності даного діагнозу використовується імуноферментний аналіз чи імунний блоттинг. Їхня достовірність дещо вища. Вона становить дев'яносто вісім – дев'яносто дев'ять відсотків.
Якщо говорити про найоптимальніші терміни проведення перевірки, то медики призначають її щонайменше через місяць після інфікування. Якщо основна мета - визначити, чи є у хворого цей діагноз, проводити аналіз РНК ВІЛ через 4 тижні не варто, достовірність його може бути неточною. Краще зробити це за п'ять - шість тижнів.
Якщо РНК ВІЛ не виявлено, що це означає? Це питання нерідко ставлять фахівцям у галузі медицини. Це може означати, що вірус імунодефіциту відсутній, або свідчить про те, що перевірку було проведено зарано.
Виявлення ВІЛ методом РНК у новонароджених: якою є ефективність?
Переважним методом перевірки новонароджених щодо наявності або відсутності вірусу імунодефіциту в тому випадку, якщо вони народилися у інфікованої матері, є аналіз рибонуклеїнової кислоти. І тут РНК ВІЛ 20 ме/мл виробляється у перші 10 днів життя малюка. Виявити наявність захворювання можливо за допомогою імуноферментного аналізу. Проте перед медиками стоїть інше завдання. Йдеться необхідності визначити, які антитіла виробляє організм малюка. Справа в тому, що у немовляти, народженого від інфікованої матері, вони будуть у будь-якому випадку. Однак, іноді це лише захист імунної системи, а не факт зараження. Повторно достовірність ПЛР РНК ВІЛ перевіряється через 6 місяців.
